分子生物学随堂笔记
分子生物学课堂笔记
第一节
一． 蛋白质化学性质：
一元素组成：C.H.O N是特征性组成元素占蛋白质含量的60%.
二． 氨基酸的种类：
1． 酸性氨基酸
2． 碱性氨基酸
3． 带羟基(-OH)
4． 带-SH 半胱氨基酸
5． 含硫的氨基酸
三． 肽键
四． 蛋白质的结构层次
1． 一级结构：是指多肽链中氨基酸残基的排列顺序，是蛋白质中最重要的结构。
2． 二级结构：（折叠方式）
a-螺旋 无规卷曲
注：氢键维持二级结构的作用力。
3． 三级结构：稳定蛋白质的作用力主要是次级键，蛋白质分子以折叠的方式形成。
4． 四级结构：由两个或两个以上三级结构的多肽链组成。
注：并非所有的蛋白质都具有四级结构，也并非所有的蛋白质形成四级结构才具有功能
五：蛋白质的理化性质
1． 蛋白质的酸碱性质：蛋白质是两性电解质。
2． 变性和复性：
变性不破坏肽键，一级结构保持不变，三维构象和活性均丧失。变性后的蛋白质可以复性。
变性和沉淀的关系：变性的蛋白质容易沉淀，但沉淀的蛋白质不一定变性。
六：蛋白质的纯化：
1． 根据分子大小的纯化方法：
(1)透析和超滤
(2)离心
(3)凝胶过滤层析
2． 利用溶解度差别的纯化方法
(1)等电点沉淀
(2)盐析 包括：强性电解质和与水互溶的有机溶剂。
3．根据电荷不同的纯化方法
(1) 电泳 SDS-PAGE 原理：根据分子量大小的不同
SDS(十二烷基硫酸钠) 常见的洗衣粉
(2)l离子交换层析 原理：根据所带电荷不同
4根据亲和力的纯化方法
(1)亲和层析
(2)抗体（或酶的底物）
第二节
一． 核酸 由DNA和RNA组成 遗传物质有RNA基因组和DAN基因组。
基本结构单位是核甘酸。
二． DNA分子结构
一级结构是知核甘酸序列。按5’—¬¬¬>3’的方向从左到右书写。
二级结构是双螺旋结构
特点：1。A=T G=C
2．无组织器官特异性
3．种属特异性
4．不随年龄环境而改变
三．RNA分子结构
主要功能是控制蛋白质的合成。
包括：tRNA rRNA mRNA 三大类
1. tRNA二级结构是三叶草型 其三级结构是倒L型
2. mRNA的5‘端有帽子结构，3‘端有ploy A尾
3. 5.8SrRNA的存在是真核与原核核糖体大亚基之间的明显区别。
4. polyA尾是真核mRNA的成熟标志之一，使之能够从核内输送到胞质，还可能影响mRNA的半寿期，并且提供判断mRNA能否作为翻译模板的信号。
第三节
一、 酶的化学本质和结构
1、 具有催化活性的酶都是蛋白质，只有核酶是RNA.
2、 缀合蛋白酶中的蛋白质部分决定酶催化的专一性。
辅酶通常起传递氢原子、电子或者基因的作用。
3、 Km值与酶的浓度无关，但随温度、PH、离子强度的变化而改变.
4、 酶促反应的特点：a、高度特异性
b、高效率：降低反应活化酶
调节包括：a、慢调节
b、快调节（包括：①酶原的激活 ②共价的修饰 ③变购酶）
5、酶促反应的动力学：
a、底物浓度
b、酶浓度
c、温度
d、PH
e、激活剂与抑制剂（其中抑制又分为可逆抑制和不可逆抑制）
二、酶的催化机制
1、过渡态是指反应物在反应途径中能量最高、最不稳定的形式，即反应物在反应之前的能量状态。
2、活化能：是在一定温度下，1摩尔底物全部进入活化状态所需要的自由能。
3、结合能：是酶-底物相互作用所产生的能量，是降低酶促反应活化能和稳定过渡态的主要能量来源。
三、 细胞信号传递
1、 动物细胞分泌产生的信号分子有：旁分泌、内分泌、自分泌信号。
2、 细胞表面受体主要分为：G蛋白偶联受体、酶偶联受体和离子通道受体。
第四节
DNA的生物合成与损伤修复
一、DNA复制
1、特点
（1）半保留复制
（2）方向5‘——3’
（3）因子酶作用顺序
（4）引物酶
（5）DNA合成需引入
（6）DNA聚合酶
（7）模板DNA
（8）原料dNTP
（9）产物DNA
注：引物的主要形式呈RNA
2端粒梅概念
端粒梅是一种核糖蛋白（RNP）是有逆转录酶治性的端粒酶，利用RNA模板，合成模板DNA的引端。
二、DNA损伤修复
DNA损伤修复主要以切除修复为主。包括：碱基切除修复核有酸切除修复错酸修复。
三、逆转录（反转录）
一种酶在体外能以RNA为模板合成DNA，这一过程叫做逆转录，这种酶叫做逆转录酶。
四、RNA的生物合成与加工
转录（以原核生物作为讲解）
1、概念转录呈以DNA为模板合成RNA的过程。转录的误差产比复制高约100000倍
特点：（1）不对称转录。
（2）方向5‘——3’
（3）RNA聚合酶
（4）不需要引入
（5）DNA模板车
（6）原料呈ATP
（7）产物RNA
2、启动子 呈转录起始区，呈特殊DNA条件序列
3、了解多顺反子和单顺反子
第五节
一．蛋白质生物合成(翻译)
1）翻译的起始秘码子为AUG。
秘密码子的特点：
1．起始密码子为AUG，终止密码子包括：UAA。UAG。UGA 三种。
2．连续性
3．简单性
4．通用性
2）蛋白质合成概念(理解)
特点：1。多票核糖体
2.方向：从N端C端
3． 模板为Mrna
4． 原料为氨基酸
5． 产物为多肽链
6． 主要酶为转肽酶
7． 由GTP提供能量
二.基因表达调空
(一)原核基因表达调控
1)特点：1.时间特异性（阶段）
2.空间特异性（组织器官）
2）#纵子是由结构基因和调控序列组成
3）原核基因表达调控的方式：
1．管家基因 特点：1.细胞生理所必须
2.受外界环境的影响比较小
3.各组织器官的时间表达
2．奢侈基因
4)基因转入的因素
1．DNA调节序列
2．转录因子
3．RNA聚合酶
（二）真核基因的表达调控
1)真何生物转入的特点：
1．染色体活化 表现在1.对核酸酶高度反应2.低甲基化3.组蛋白发生修饰
2．以正向调节转入
3．单顺子结构
4转录.翻译分割开
2)DNA调节序列
1.启动子 特点：1。转录所必须
2．位于基因尾壁侧已
3．进距离调节
4．对基因的调节具有反向性
2.增强子 特点：1。必须通过启动子
2．位于基因的上中下游
3．可进可远的调节
4．无方向性
5．常具有组织器官的特异性
第六节
一、基因工程的基本原理
1、限制性内切酶
包括3种类型，其中类型二是基因工程中重要的工具酶，它的切割位点在识别点以内或附近，切割DNA后产生末端或者黏性末端。
2、基因文库（理解概念）
PCR 步骤：
（1）变性----->退户---延伸。
（2）Tag DAN票合酶（耐热）
（3）退
